目前，核酸筛检系统（Nucleic Acids Testing，NAT）已广泛用于血制品常规病原体（乙肝、丙肝、艾滋、梅毒）的核酸检测，极大降低了相关疾病的输血传播。但是，在输血感染性风险中，血小板的细菌污染及相关败血症性输血反应仍是棘手的问题。将核酸筛检技术用于细菌污染检测还有不少困难，包括：1、细菌污染不像特定病原体，没有统一的标准品；2、缺少合适的内参质控排除假阳性或假阴性结果；3、核酸扩增聚合酶（Taq）大多是细菌来源，带有痕量的细菌核酸成分。
近期，苏州医工所血液免疫学研究中心提出一种双重荧光定量PCR方法可提高细菌污染检测的可靠性：设计一条人工核酸序列（IRC）作为内参，其特点是IRC与靶基因共用同一对引物进行扩增，分别用不同荧光探针进行检测。通过精确控制IRC分子数达到阳性检出限，以其Ct(i)值作为阈值，只有样本检测的Ct(s)值小于或等于Ct(i)时，检测结果才可认定为阳性。一种双样本混合的t测验（two samples pooled t-test）统计学方法可用于帮助判断两个Ct值的大小。IRC还可以包装成噬菌体，用于监控核酸样本提取过程。
此外，该双重荧光定量PCR方法可通过分别检测细菌的DNA（脱氧核糖核酸）与RNA（核糖核酸），计算不同Ct的比值，能判断细菌是处于生长繁殖期或者已经是死菌，从而帮助判断血制品灭活的效果。该方法不仅能用于血制品细菌污染检测，理论上也能开发成其他外源基因核酸定量检测的有效方法。
相关研究结果已发表在PLOS ONE，2015，10(7)：e0134743.（SCI，IF=3.534）
链接：http://journals.plos.org/plosone/article?id=10.1371/journal.pone.0134743
以上工作得到江苏省自然科学基金，苏州市科技专项项目的支持。
图-1、IRC双重荧光定量PCR原理图
图-2、IRC双重荧光定量PCR性能测试
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