激光共聚焦扫描显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy)以激光作为光源逐点激发样品内荧光,采用精密针孔滤波技术,有效抑制了非聚焦平面的杂散光,具有层析成像能力和很高的成像信噪比,广泛应用于生物医学等研究领域。图1为共聚焦显微镜的工作原理示意图,图2为共聚焦显微镜与普通荧光显微镜的成像结果对比。
图1. 共聚焦成像原理 图2. 共聚焦成像和普通荧光成像对比
在多年的共聚焦显微镜研制基础上,中科院苏州医工所推出了一款小型的多路激光激发-多路探测通道的滤光片型共聚焦显微镜,如图3所示。该款共聚焦显微镜包含激光器、共聚焦扫描箱、电控箱、显微镜、电脑五部分组成。该款共聚焦显微镜的激光器可根据用户需要进行激光器数量和激光中心波长的选择;共聚焦扫描箱是整个共聚焦显微镜的核心,内部包含了共聚焦成像和探测等多个模块,其体积小巧(长460mm,宽300mm),高度可调,能够与不同品牌的荧光显微镜匹配,进行共聚焦成像。目前课题组在共聚焦成像方面发表论文13篇,其中SCI收录4篇,EI收录5篇;申请专利26项,其中发明专利15项,实用新型专利11项。
(a)
(b)
图3. (a)滤光片型共聚焦显微镜,(b)软件成像界面
该款共聚焦显微镜的具体指标如下:
技术指标
激光波长 |
488nm,405nm, 561nm, 638nm(标准配置),激光数目和波长可根据用户需求选择,功率可调 |
扫描模式 |
检流计扫描振镜 |
成像速度 |
0.5fps(512×512 pixels)(可升级) |
图像分辨率 |
512×512 pixels,1024×1024 pixels(可升级) |
视场大小 (主像面) |
20mm |
共焦物镜 |
10×、20×、40×、60×、100×(物镜选配) |
探测通道 |
4 |
分光模式 |
滤光片分光(可根据需要配置光谱分光) |
载物台配置 |
手动载物台、Z轴电动(可选配) |
图像采集 |
单通道/多通道同时采集 |
软件 |
显微镜配置、图像获取、扫描文件管理、图像可视化与交互、三维扫描控制、三维重建等 |
共聚焦扫描箱 |
高度可调,可与多种显微镜匹配 |
其他 |
升级版可根据具体客户需求定制 |
部分成像结果,如下:
图4. 药物制剂在黏液穿透实验共聚焦成像
图5. 药物制剂黏液穿透共聚焦三维成像
图6. 小鼠脑神经干细胞切片共聚焦成像
图7. Hela细胞F-Actin染色共聚焦成像