MNSs血型是继ABO血型后被检出的第2个血型系统，Milternberger亚血型系统(subsystem)是其中一类特殊的亚血型系统，Mia(MNS7)和Mur(MNS10)血型抗原是该亚系统中最具有临床意义的2个同种异体抗原。诸多文献报道其相应抗体常引起急性溶血性输血反应和新生儿溶血病，因此该抗体检测愈加受到临床重视。
目前，临床主要依赖新鲜GP. Mur表型新鲜红细胞来检测抗-“Mur”，但该方法不能区分抗-Mia和抗-Mur，同时红细胞保存时间短且难以获得，这限制了临床抗-Mia和抗-Mur检测工作的开展。对此，中国科学院苏州生物医学工程技术研究所李勇研究员带领的血液免疫学与免疫遗传学研究组经过技术攻关，成功建立了不依赖GP. Mur表型红细胞的抗-Mia及抗-Mur检测固相免疫吸附实验技术。首先，合成生物素标记的Mia及Mur血型抗原多肽，经凝集抑制试验并通过流式细胞术检测确认其抗原特异性后，通过亲和素固定于U型微孔板孔内作为反应板。同时，将抗球蛋白和人IgG致敏红细胞作为指示系统以建立抗-Mia及抗-Mur检测固相免疫吸附试验技术。结果表明，采用该方法与试管法血凝试验结果一致。此外，为提高检测敏感性，研究人员在特异性多肽序列 5’端前添加“GGDGDGDGDG”序列以延长多肽抗原长度，提高了多肽在微孔板中的结合率。该方法灵敏度高于试管法，克服了传统红细胞试剂保存时间短、抗原谱不明确且难以获得的缺点，适合于大标本和自动化检测，为临床抗-Mia和抗-Mur的检测和鉴定及配血工作提供有效的参考。相关结果已发表于中国输血杂志,2014 ,7(3):248-250。
同时，研究人员在试验过程中还建立了纳米磁珠免疫分析技术，以应用于检测人红细胞血型Mia(MNS7)抗体。利用水热合成法合成纳米磁珠，在其表面包被二氧化硅层，提高磁性复合微粒的分散性；并进行3-氨丙基三乙氧基硅烷( APTES)氨基化修饰，磁性颗粒表面的氨基可以进一步偶联合成的Mia抗原多肽；利用碳酰二亚胺盐(EDC)分别将人免疫球蛋白G (IgG)及牛血清白蛋白(BSA)偶联于磁珠表面，优化偶联条件，并通过流式细胞仪检测荧光标记的抗IgG来评价偶联效果；将人红细胞Milternberger亚血型Mia(MNS7)抗原多肽偶联于磁珠表面，检测血清中的抗体，实验结果如下图所示。利用Mia多肽免疫磁珠检测200例人血清标本，结果与临床常用的新鲜GP. Mur表型红细胞检测结果一致，初步证明此免疫磁珠检测系统用于筛检人血清抗-Mia的有效性，有望为临床提供一种有效的抗体检测方法，解决目前临床上该抗体检测试剂缺乏的难题。相关结果已发表于中国输血杂志,2014 ,7(3):244-247。
a Fe3O4-NH2+阳性血清+Anti-Ig(G,A,M)-FITC(空白对照);b Fe3O4-Mia+阴性血清+Anti-Ig(G,A,M)-FITC(阴性对照);c Fe3O4-Mia+阳性血清+ Anti-Ig(G,A,M)-FITC
荧光二抗检测 Mia多肽免疫磁珠的流式细胞图
以上研究获得江苏省自然科学基金青年基金(BK20130343)、苏州市医疗器械与新医药专项基金(ZXY2013017)的支持。
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